Результаты поиска: 2 док. (сбросить фильтры)
Статья: Разработка продуцентов терапевтических пептидов на основе Esherichia coli BL21 и технологии их культивирования
Введение. В последнее десятилетие пептиды с молекулярной массой менее 5 кДа используется в медицине и биотехнологии для лечения различных заболеваний. Химический синтез пептидов имеет ограничения, такие как низкий выход и эффективность синтеза, сложность масштабирования. Альтернативой является использование Escherichia coli. Разработка эффективной технологии синтеза пептидов остается актуальной задачей в связи с низкой продуктивностью штаммов-продуцентов.
Цель. Разработка высокоэффективных штаммов Escherichia coli BL21, экспрессирующих терапевтические пептиды молекулярной массой менее 5 кДа, и технологии их культивирования.
Материалы и методы. Генетические конструкции получили с использованием рестриктазно-лигазного метода, подлинность подтвердили секвенированием по Сенгеру. Технологию культивирования разработали с использованием подхода Design of experiments. Валидацию условий культивирования проводили в биореакторе Biostat B. Гибридные белки очищали методом металл-хелатной хроматографии, целевые пептиды получали гидролизом с помощью ULP-протеазы. Количественное содержание целевого белка определяли капиллярным электрофорезом, подлинность белка – ВЭЖХ-МС и косвенным неконкурентным ИФА. Результаты и обсуждение. В ходе исследований разработаны высокоэффективные штаммы-продуценты пептидов и оптимальные условия культивирования: рН – 7,5 ± 0,5, температура культивирования – 37 °C, оптическая плотность индукции – 2,7 ± 0,3, концентрация ИПТГ – 0,05 мМ. Продуктивность штаммов-продуцентов достигла 4,82 ± 0,05 г/л. Получены образцы очищенных пептидов.
Заключение. Разработанная технология позволяет получить пептиды с высоким выходом, не описанным ранее исследователями. Практическая значимость данной работы заключается в возможности применения данной технологии для получения пептидов с различными физико-химическими свойствами.
Статья: Оценка различных составов питательной среды для культивирования Tetrahymena pyriformis, используемой в биотестировании объектов окружающей среды
В статье представлены результаты исследования различных составов
питательной среды на культуральные особенности и развитие Tetrahymena pyriformis (далее – T. pyriformis).
В ходе исследований определен оптимальный компонентный состав питательной среды, состоящей из 1,0 г пептона бактериологического, 0,3 г дигидрофосфата
калия, 1,7 г гидрофосфата натрия, 0,2 г хлорида натрия на 100 см3 дистиллированной воды.
Установлено, что новый состав питательной среды обеспечивает выход биомассы культуры в 1,8 раза выше, чем при культивировании в классической пептонной среде, и при этом является оптимальным для роста и развития инфузорий.
Проведены исследования по оценке чувствительности культуры инфузорий на модельном соединении – бихромате калия.
Установлено, что гибель 50 % инфузорий наступает при воздействии раствора модельного соединения в концентрации, равной 0,8 мг/дм3, а гибель 100 % культуры – при его внесении в концентрации 1,6 мг/дм3.