SCI Библиотека

Введение. Производство Fc-слитых белков в прокариотических системах приводит к образованию нерастворимых агрегатов из-за неправильного сворачивания полипептидных цепей. Для получения функциональных белков требуется стадия рефолдинга, процесс подбора условий которого может быть трудоемким. Оптимизация параметров ренатурации с помощью подхода дизайна эксперимента (Design of Experiments, DoE) позволяет рассчитать оптимальные параметры процесса и оценить влияние факторов и их взаимодействий.

Цель. Оценка влияния концентраций окислителя, восстановителя и pH буфера ренатурации на эффективность рефолдинга Fc-слитого белка in vitro и определение оптимальных условий.

Материалы и методы. В работе использовали тельца включения Fc-слитого белка, полученные в бактериальной системе экспрессии Escherichia coli BL21. Планирование эксперимента осуществляли с помощью ортогонального композиционного дизайна (Orthogonal Central Composite design, CCO). Дизайн эксперимента, статистическую обработку данных и оптимизацию параметров производили в программе MODDE (v. 12.1, Sartorius Stedim Data Analytics AB, Германия). В качестве откликов использовали показатели хроматографической чистоты и выход целевого белка по данным высокоэффективной жидкостной эксклюзионной хроматографии.

Результаты и обсуждение. Проведена оптимизация условий ренатурации Fc-слитого белка с применением подхода DoE. На основании полученных данных были построены графики поверхности откликов и определены оптимальные значения параметров pH буферной среды, концентрации окислителя и восстановителя. Полученные статистические модели демонстрируют высокую прогностическую способность и воспроизводимость данных. Была проведена успешная валидация процесса рефолдинга в оптимизированных условиях. Наблюдали снижение количества высокомолекулярных примесей и неправильно свернутых форм белка в целевом продукте. Значение хроматографической чистоты целевого белка по данным высокоэффективной жидкостной эксклюзионной хроматографии удалось повысить более чем на 10 %.

Заключение. Было установлено значительное влияние pH буферного раствора, соотношения концентраций окислительно-восстановительной пары и их взаимное влияние на выход и хроматографическую чистоту Fc-слитого белка. Показана тесная взаимосвязь эффектов окислительного и восстановительного компонентов с pH раствора. Повышенный pH буферной среды улучшает растворимость белка, что создает лучшие условия для правильного сворачивания полипептидной цепи.

В статье анализируется судебная практика по привлечению к уголовной ответственности лиц, совершивших деяния, предусмотренные ст. 2822 УК РФ и связанные с деятельностью экстремистской организации «Правый сектор». Исследуются специфика, характерная для субъекта таких преступлений, обстоятельства, способствовавшие совершению преступлений, и меры, направленные на их профилактику.

Статья посвящена обобщению и анализу различных подходов к определению предмета состава преступления, предусмотренного ст. 245 УК РФ, что позволило сформулировать авторское определение указанного понятия. Основной для исследования послужили российское законодательство, научные работы по проблематике исследования, материалы опубликованной следственно-судебной практики и самостоятельное социологическое исследование, проведенное в форме опроса сотрудников подразделений предварительного расследования органов внутренних дел. Методологическую базу составила система общенаучных и частнонаучных методов познания (формально-юридический, сравнительно-правовой и системно-структурный методы). В статье проанализированы различные подходы к определению предмета жестокого обращения с животными, а также материалы следственно-судебной практики по данной проблеме, что позволило автору предложить свой вариант примечания к ст. 245 УК РФ в целях совершенствования уголовного законодательства и правоприменительной практики, который содержит дефиницию понятия «животные».

Статья посвящена актуальным проблемам соблюдения международных договоров и принципов гуманизма в контексте применения запрещенных средств и методов ведения боевых действий. Анализируя правовые источники, устанавливающие вето на применение в вооруженных конфликтах запрещенных средств и методов, а также правоприменительную и судебную практику в связи с проведением специальной военной операции на Украине, автор приходит к выводу, что ключевым нормативно-правовым элементом в противодействии применению запрещенных средств и методов ведения войны является комплексная реализация юридических и социальных мер в рамках национального и международного законодательств.

Статья посвящена проблемам привлечения к уголовной ответственности за преступления в налоговой сфере в России. Рассмотрены показатели налоговых преступлений, налоговые преступления в сегменте «информационного бизнеса», определен ряд причин, способствующих совершению данного вида преступности, а также предложены пути решения обозначенных проблем.

В статье анализируются отдельные аспекты повышения эффективности осуществления оперативно-розыскного обеспечения возмещения имущественного ущерба, причиненного преступлениями. Содержатся практические рекомендации по документированию преступной деятельности проверяемых лиц с целью обеспечения возмещения, причиненного преступлениями ущерба.

Статья посвящена проблеме законодательного регулирования вопроса производства следственных действий по горячим следам. Авторы сравнивают разрешенные к производству на стадии возбуждения уголовного дела следственные действия с неотложными, на основании чего приходят к выводу о наличии существенных противоречий в законодательстве. Устранить существующие проблемы предлагается с помощью прокурорского надзора либо судебного контроля, внеся соответствующие изменения в УПК РФ.

В статье отмечается важная роль конфискации имущества в противодействии преступлениям в сфере государственных закупок, проводится анализ правовой природы конфискации, рассматриваются проблемные вопросы конфискации имущества по преступлениям в сфере закупок. Автором обосновывается предложение по расширению перечня конфискационных преступлений.

В статье рассматриваются проблемные вопросы использования систем видео-конференц-связи при производстве следственных действий. Автором на основе обзора судебно-следственной практики реализации положений уголовно-процессуального закона, закрепляющих порядок проведения следственных действий с использованием систем видео-конференц-связи, выявлены две группы проблем (юридические и технические) и предлагаются пути их решения.

В статье анализируются основания и порядок назначения пенсий за выслугу лет государственным служащим в Российской Федерации. Автор исследует правовое регулирование пенсионного обеспечения в отношении разных видов государственной службы, в результате чего приходит к выводу о наличии достаточно существенных и не всегда обоснованных отличий в отдельных моментах назначения и определения размера пенсии для различных категорий государственных служащих. В работе сформулированы предложения, направленные на совершенствование законодательства о пенсионном обеспечении государственных служащих, а также на унификацию правового регулирования пенсионного обеспечения военнослужащих и государственных служащих, относящихся к иным видам государственной службы. С целью предотвращения возможного злоупотребления правом и обеспечения справедливости предлагается пересмотреть механизм расчета размера пенсии для военнослужащих и государственных служащих, относящихся к иным видам государственной службы. По мнению автора, размер пенсий данных категорий лиц должен определяться, исходя из их среднемесячного заработка за определенный период, в то время как в настоящее время размер их пенсии определяется в процентах от должностного оклада и оклада по воинскому или специальному званию с процентной надбавкой за выслугу лет на день увольнения.